Resolução de problemas do experimento ELISA: Análise de problemas comuns e causas

27 de junho de 2024

Os kits ELISA da ELK são conhecidos por sua ampla gama de indicadores e integridade excepcional, disponíveis em milhares de unidades. Eles apresentam alta precisão com valores de coeficiente de variação (CV) intra-ensaio e inter-ensaio abaixo de 10% e uma taxa de reação cruzada de menos de 5%.

Esses kits oferecem boas taxas de recuperação entre 85% e 115%, alta especificidade com uma taxa de reação cruzada abaixo de 5% e alta sensibilidade no nível de picograma (pg). Além disso, vêm com um conjunto completo de reagentes prontos para uso, garantindo excelente integridade e facilidade de uso.

Após a boa recepção dos kits da ELK, hoje queremos dar uma visão geral dos problemas que podem ser encontrados durante a realização da técnica:

Fundo alto / Coloração não específica

Descrição dos resultados:
- Após a terminação, os resultados de toda a placa mostram uma cor amarela ou clara uniforme.
- A curva padrão é linear, mas o fundo é muito alto.
Possível razão:
- A placa ELISA não foi lavada suficientemente.
Recomendações e precauções:
- Certifique-se de que a mesma quantidade de solução de lavagem seja adicionada a cada micropoço durante o processo de lavagem.
- Após a lavagem, pressione firmemente a placa ELISA no papel absorvente para remover o tampão residual.

Placa sem cor

Descrição dos resultados:
- Após a etapa de desenvolvimento da cor, todos os poços da placa ELISA estão incolores.
- O controle positivo não é óbvio.
Possível razão:
- Falta de um reagente ou de uma etapa.
Recomendações e precauções:
- Revise o manual em detalhe e siga estritamente os passos operacionais.

Cor clara

Casos #1:

Descrição dos resultados:
- O padrão é normal, mas a cor da amostra é clara.
- O resultado visual é normal, mas o valor de leitura do leitor de microplacas é baixo.
Possível razão:
- A amostra a ser testada pode não conter amostras fortemente positivas, então o resultado pode ser normal.
Recomendações e precauções:
- Em caso de dúvida, por favor, teste novamente.

Casos #2:

Descrição dos resultados:
- Todos os poços, incluindo padrão e amostras, são mais claros em cor.
Possível razão:
- Os reagentes e amostras não estão equilibrados antes do uso.
Recomendações e precauções:
- Todos os reagentes e amostras devem ser equilibrados à temperatura ambiente por cerca de 30 minutos.

Casos #3:

Descrição dos resultados:
- Pobre repetibilidade
Possível razão:
- Ao adicionar líquido, muito permanece na parede medial dos poços.
Recomendações e precauções:
- Ao adicionar líquido, a ponta deve tentar adicionar o líquido ao longo do fundo da parede medial dos poços sem tocar o fundo do poço.

Casos #4:

Descrição dos resultados:
- A cor da placa é caótica e irregular.
Razões possíveis:
- Contaminação cruzada durante a lavagem manual da placa.
- Contaminação cruzada ao bater.
Recomendações e precauções:
- Ao lavar as placas à mão, as primeiras 3 injeções da loção devem ser descartadas imediatamente. Defina o tempo de imersão para as vezes seguintes para reduzir a contaminação cruzada.
- Use uma toalha de papel absorvente adequada ao bater a placa. Não bata substâncias irrelevantes no poço da placa e tente não bater na mesma posição para evitar contaminação cruzada.

Seguindo esses passos de solução de problemas, a confiabilidade e a precisão dos seus experimentos ELISA podem ser significativamente melhoradas.

Para protocolos detalhados e mais assistência, consulte sempre o manual específico fornecido com seu kit ELISA. Os seguintes são indicadores mais vendidos da ELK, disponíveis na CymitQuimica:

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